利用赛多利斯Octet分子互作分析系统和生物传感器提升AAV定量效率PG电子官方网站

　　腺相关病毒（Adeno-associated viruses, AAV）作为一种基因递送工具，具有以下优点：安全性好、免疫原性低、能够感染分裂和非分裂细胞，并能介导基因的长期稳定表达。因此，AAV是目前基因治疗中的首选载体，包括天然型（AAV）和重组型（rAAV）等多种血清型。常用的AAV血清型有AAV1、2、5、6、7、8、9和rh10等，不同的AAV血清型具有不同的衣壳蛋白空间结构，并由于其组织特异性（或亲嗜性）不同而被广泛应用。

　　2022年5月，国家药监局药审中心发布了《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》通告，指出病毒颗粒数是重要的质量分析指标之一。全新推出的Octet分子互作仪 AAVX腺相关病毒定量生物传感器，有效消除了目前定量方法中通量低、成本高、耗时长的技术瓶颈。一键解锁各类血清学AAV病毒衣壳定量，极大地提高了分析的效率和并降低成本。

　　1. 为了提高AAV病毒载体的质量和产品，需要在多个工艺步骤中快速定量AAV浓度，以高效优化生产工艺。

　　3. 时效性差且流程复杂。客户需要将样品送至分析部门或实验室检测，通常需要等待2到5天才能得到结果。这使得客户需等待结果后才能进行下一步工作或优化调整工艺流程。

　　基于药典认可的生物层干涉（BLI）技术，赛多利斯Octet生物传感器R8/RH16/RH96高通量分子互作平台可以在5分钟内一次性检测8、16或96个样品。AAVX生物传感器可一步法直接定量纯化或粗样品，适用于各种血清型（AAV1至AAV9及AAVrh10）。其线 vp/mL。传感器可再生重复使用约20次，降低单个样品检测成本。Octet分子互作仪BLI Discovery v.13.0.1软件预设了AAV定量模板。

　　大多数血清型的动态范围在8.5x108至1.0x1013 vp/mL之间，线个数量级，无论高滴度和低滴度样品都能得到准确测量。且动态范围内测试的所有浓度均观察到良好的回收率 (80–120%) 和精密度 (CV10%)。

　　AAV的整个生产流程会用到不同的缓冲液和培养基基质，Octet对纯化样品和粗制样品均表现出优异的处理能力。使用样品稀释剂缓冲液对粗样品进行4倍至10倍稀释，即可显著减轻样品中基质效应PG电子官方网站。

　　Octet BLI搭配AAVX传感器可以实现快速的检测设置、分析和实时数据显示，从而能够监控和优化每个检测步骤。为了证实Octet AAVX检测法和ELISA之间的相关性，来自BridgeBio Pharma和REGENXBIO公司的研究人员在AAV生物工艺流程的不同步骤测试了样品中的不同AAV血清型。

　　图7. 使用Octet AAVX生物传感器和ELISA定量检测纯化样品及粗制样品（生物工艺中间体）中的AAV8和AAV9，数据显示两种方法具有良好的相关性。数据由REGENXBIO Inc.提供。

　　基于Octet BLI分子互作分析系统 和Octet AAVX 生物传感器的AAV定量检测策略可广泛应用于AAV 上游和下游工艺各阶段，优化传统终点法耗时费力的确定，提供可靠、准确且便捷的AAV定量新思路。